无甘油 Phi29 DNA 聚合酶（HC）
Glycerol-Free Phi29 DNA Polymerase (HC) 是一种高度加工性、高保真酶，具有很强的链置换活性，可实现稳健的 DNA 等温扩增。它专为需要精确、高效 DNA 合成的应用而设计，是全基因组扩增、单细胞基因组学和分子诊断的理想选择–无论是液态还是冻干检测形式。
主要产品功能
- 强大的链置换活性可在 30°C 温度条件下进行高效等温扩增
- 处理能力强，可合成长度达 70 kb 的产品
- 外切酶活性（3' → 5'）为高保真复制提供校对能力
- 产量高，是少量模板扩增的理想选择
- 提高冻融稳定性，优化液体和冻干化验开发
说明
Meridian 的 Glycerol-Free Phi29 DNA Polymerase (HC) (MDX240) 是一种高度加工性的酶，具有很强的链置换活性，可对低拷贝样本进行高效的 DNA 等温扩增。它的 3′→5′ 外切酶（校对）活性可确保高保真扩增，而其卓越的加工性能可合成超长、高分子量的 DNA 产物。
这种不含甘油的高浓度配方针对多重置换扩增（MDA）和滚动圈扩增（RCA）进行了优化，有助于全基因组扩增、单细胞基因组学和分子诊断。该酶具有很强的链置换活性，即使使用低拷贝模板也能确保性能稳定。
Glycerol-Free Phi29 DNA Polymerase (HC) 不含甘油，经过优化后性能稳定，是开发液体和冻干形式诊断测定的理想选择。
要点
- 实现稳健、高精度的 DNA 等温扩增
- 用最少的模板生成超长、高分子量 DNA
- 适用于全基因组扩增 (WGA)、单细胞基因组学和分子诊断
- 无甘油配方提高了诊断应用的稳定性
图 1.滚圆放大（RCA）示意图。
滚圆扩增（RCA）是一种合成超长 ssDNA 的高效等温扩增方法，它使用环状 DNA 模板和引物生成长的连接 DNA 链。链置换 DNA 聚合酶（Phi29 DNA 聚合酶）不断合成 DNA，围绕环形模板移动，产生原始序列的多个串联重复序列。这一过程可产生高分子量的 DNA，使 RCA 成为基因组研究、分子诊断、病原体检测和单细胞分析等应用的理想选择。
协议范例
| 试剂名称 | 容量 | 最终浓度 |
|---|---|---|
| Lyo-Ready Phi29 DNA Pol 反应缓冲液，5x | 10 µL | 1 x |
| 抗外引物（100 μM） | 0.5 µL | 1 μM |
| 100 mM dNTP 混合液 | 0.5 µL | 1 mM |
| dNTP 混合液，100 mM | 0.2 μL | 1 mM |
| 圆形 DNA 模板 | X μL | 变量 |
| 无甘油 Phi29 DNA 聚合酶（HC），100 U/μL | 0.1 μL | 10 U/rxns |
| 100 mMMgCl2混合液 | 2.5 μL | 5 mM |
| 水质 | 最多 50 μL |
目录和手册
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常见问题：不含甘油的 Phi29 DNA 聚合酶（HC）
Phi29 聚合酶的推荐温度是多少？
Phi29 聚合酶的建议温度为 30°C。
反应是否需要含有 DTT？
DTT 可提高 Phi29 聚合酶的活性，因此建议对于经过多次冻融循环的反应缓冲液，应通过添加额外的 DTT 来补充 DTT。
如何使 Phi29 DNA 聚合酶失活？
Phi29 DNA 聚合酶可在 65°C 下加热灭活 10 分钟。
使用什么类型的底漆？
Phi29 DNA 聚合酶具有很强的 3′-5′ 外切酶活性，可以降解未受保护的引物。因此，强烈建议使用 3′端至少有两个硫代磷酸核苷酸键的引物。
为什么不含甘油？
以不含甘油的配方供应的酶与冻干或风干等常温稳定工艺兼容
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