Meridian 不含甘油的 T4 DNA 连接酶（HC）
- 有效连接钝端和内聚端。
- 修复双链 DNA、RNA 和 DNA/RNA 杂交体中的单链缺口。
- 将双链寡核苷酸连接体或适配体与 DNA 连接，用于 NGS 文库构建和克隆。
- 不含甘油，适合冻干和常温保存，是护理点 (POC) 检测的理想选择。
不含甘油的冻干 T4 DNA 连接酶（HC）可保持其活性
不含甘油的液态或冻干 T4 DNA 连接酶（HC）在室温下的稳定性。在每个条件下，评估 330 个单位的 T4 DNA 连接酶在标准连接反应中连接 750 纳克经 HindIII 消化的 λ DNA 的能力，连接反应在 RT 下进行 1 小时，随后在琼脂糖凝胶上检测。使用 ImageJ 分析评估相对于 T4 DNA 连接酶（T0）的连接效率。结果表明，不含甘油的 T4 DNA 连接酶（HC）不会受到冻干的影响，并且在重新水合后仍能保持其活性。
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说明
不含甘油的 T4 DNA 连接酶（HC）需要连接酶反应缓冲液。不含甘油的 T4 DNA 连接酶（HC）的浓度（以 Weiss 单位计）高于市场上其他连接酶的浓度，而且可以冻干，因此非常适合微流控技术和护理点检测。
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常见问题：不含甘油的 T4 DNA 连接酶（HC）
什么情况下应选择 T4 DNA 连接酶？
T4 DNA 连接酶用于连接内聚末端（室温下 10 分钟）或钝末端（室温下 2 小时），或如果连接需要过夜，则应使用 T4 DNA 连接酶。如果需要热灭活，则应使用 T4 DNA 连接酶。建议使用浓缩的 T4 DNA 连接酶来连接单碱基悬垂。
Weiss Unit 的定义是什么？
一个韦斯单位的定义是：在指定的反应条件下，37°C，20 分钟内将 1 nmol 32P 标记的无机焦磷酸盐转化为诺里特吸附材料（活性炭）所需的酶量（Weiss, B. 等人，J. Biol.Chem., 243, 4543 (1968)）。
然而，由于魏斯单位不是 DNA 连接的直接测量值，而是酶腺苷酸化反应的间接测量值，然后再确定 ATP-PPi 交换，因此也使用内聚末端单位，因为这是 DNA 连接的直接测量值（内聚末端单位的定义是：在 20 µL 的 1X T4 DNA 连接酶缓冲液中，16°C 下 30 分钟内使λ DNA 的 Hind III 片段 50%连接所需的酶用量）。一个内聚末端单位等于 0.015 个魏斯单位，或一个魏斯单位等于 67 个内聚末端单位。
T4 DNA 连接酶能否受热失活？
可以，在 65 °C 下加热 10 分钟。
连接酶反应缓冲液中需要什么？
1x 连接酶反应缓冲液的一般配方为 50 mM Tris-HCl（pH 7.8）、10 mM MgCl2、10 mM DTT 和 10 mM ATP。
Mg 和 ATP 都是反应所必需的辅助因子，每形成一个磷酸二酯键就要消耗两个 ATP 分子。
为什么不含甘油的 T4 DNA 连接酶（HC）浓度如此之高？
提高 T4 DNA 连接酶的浓度有助于试剂量有限的低容量反应，例如微流体和护理设备中的盒式反应。
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