Taq DNA 聚合酶

Taq DNA 聚合酶是新一代 DNA 聚合酶和新型缓冲液系统的结合体,设计用于对多种 PCR 模板进行高产率、快速的 PCR 扩增。它的开发目的是提供非常稳健的扩增效果,使其在大多数 PCR 检测中都能表现出色,包括在有 PCR 抑制剂存在的情况下对具有挑战性的模板进行扩增。

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Meridian 的 Taq DNA 聚合酶

强效 PCR 扩增富含 GC 的人类基因组 DNA

使用引物和 Taq DNA 聚合酶对人类基因组 DNA 进行一式两份的序列稀释(分别为 1 μg、200 ng、100 ng、50 ng、25 ng 和 12.5 ng,1-6),以扩增人类 myc 基因的 450 bp 片段。所用基因片段的 GC 含量为 61%,选择该片段是为了展示 Taq DNA 聚合酶的高产率和灵敏度,使其成为扩增复杂 PCR 模板的最佳选择。

说明

Taq DNA 聚合酶配有优化的缓冲液系统,其中含有最佳浓度的 dNTP、MgCl2、稳定剂和 PCR 增强剂,因此无需进行优化。与其他聚合酶相比,该 DNA 聚合酶的扩增能力更强,在有 PCR 抑制剂存在的情况下,也能很好地处理具有挑战性的模板,因此非常适合对各种模板进行快速 PCR 反应,而不会影响特异性或产量。

规格

说明非常高效的聚合酶,与经过优化的新型缓冲液系统一起供应,其中含有 dNTPs、MgCl2和增强剂,可提供卓越的扩增效果。
浓度5 U/µL
外观无色透明溶液
热启动
应用PCR, qPCR
样品类型cDNA, DNA
演示文稿2 瓶
存储-20 °C
混合稳定性见外标签
功能使用人类基因组 DNA 稀释系列进行 PCR,观察到单个明显的条带
DNA 污染在大肠杆菌和小鼠基因组 DNA 特异性目标的 PCR 扩增中未检测到与阴性对照重叠的痕迹。
DNase 污染检测不到降解

目录和手册

分子诊断试剂解决方案
分子诊断试剂解决方案

常见问题:Taq HS DNA 聚合酶

如果我的 PCR 检测受到太多 PCR 抑制剂的阻碍,我该如何优化?
降低模板浓度有助于最大限度地减少抑制剂的浓度,也可以增加 DNA 聚合酶和引物的用量。在某些情况下,如果无法获得 DNA,可能还需要增加一个预处理步骤。

这些术语指的是进行 PCR 检测时需要考虑的参数。
产量:在 PCR 反应中产生的 DNA 量。高产率可提高灵敏度。
保真度:酶将正确的 dNTP 加到延伸的 DNA 链上的准确性。对于标准 PCR 而言,这一点并不重要,但对于测序或表达而言,可能需要高保真混合液(如高特异性 Pfu HS 混合液 (MDX006))。
处理能力:聚合酶与模板结合的时间长短,因此可扩增片段(扩增片段)的大小。
特异性:用于衡量反应中产生的不需要的副产物。这就是进行热启动 PCR 的原因,它可以防止低温下的错引和非特异性扩增。

Taq DNA 聚合酶已通过多种 PCR 模板的验证,包括从人类、动物和植物样本中提取的 DNA,因此是以下应用的理想选择:
– 终点 PCR 检测
– 高产 PCR 检测
– 快速 PCR 检测
– 多重 PCR 检测
– qPCR 和 RT-qPCR 检测

是的,Taq DNA 聚合酶可用于定量 PCR 扩增 (qPCR),但需要热启动抗体 (MDX014)、qPCR 缓冲液(如快速 qPCR 缓冲液,4x (MDX033))或 RT-qPCR 的一步缓冲液(如 1 步 qPCR 缓冲液,4x (MDX034))和逆转录酶(如 MMLV-RT (MDX044))。

这取决于扩增子的长度和模板的复杂程度。对于快速 PCR,初始变性时间仍为 1 分钟,但对于低复杂度模板(如质粒 DNA),退火时间为 5 秒,延伸时间为 10 秒,对于 1 kb 以下的扩增子就足够了。为了找到最快的最佳条件,对于更复杂或更长的扩增片段,我们建议逐步增加延伸时间,直至 30 秒/kb。

是的,Taq DNA 聚合酶在处理富含 GC 或亚硫酸氢盐转化 DNA 等困难样本时效果非常好。不过,PCR 的热启动(如 MDX014)很重要,因为它能减少引物二聚体和非特异性扩增。
如果需要优化,我们建议从退火温度和亚硫酸氢盐转换开始,因为该过程会使 DNA 断裂,所以增加模板和聚合酶的用量可能会有帮助。

该酶的错误率约为每 2.0 x 10⁵ 个核苷酸合成 1 个错误。如果您正在寻找一种错误率较低的 DNA 聚合酶,则应使用高保真 DNA 聚合酶(如 High-Fidelity Pfu (MDX003))或混合物(如 High-Specificity Pfu HS Mix (MDX006))进行下一代测序 (NGS) 文库或表达。

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