Meridian 的 55C MMLV-RT
- 热稳定性逆转录酶活性可达 60°C
- 非常适合从病毒 RNA 基因组等具有高二级结构的 RNA 中合成 cDNA
- 灵敏检测低拷贝数 RNA 靶标
- 是开发快速、高重现性 RT-qPCR 检测的理想之选
55C MMLV-RT, MDX117
高度稳定的恒温逆转录酶，非常适合从具有高二级结构的 RNA（如病毒 RNA 基因组）中合成 cDNA。
Documents & Resources
说明
传统的莫隆尼鼠白血病病毒逆转录酶（MMLV-RT）不耐高温，只能在相对较低的温度下（最高 50°C）保持酶活性。不过，对于 cDNA 合成，有时需要较高的反应温度，因为这样可以减少可能抑制逆转录的 RNA 二级结构，并最大限度地减少非特异性引物结合。55C MMLV-RT 是一种高恒温反转录酶，具有较低的 RNase H 活性，可在高达 60°C 的温度下高效合成第一链 cDNA。这就提高了难以合成的 RNA 目标（如病毒 RNA 基因组）的 cDNA 产量，因为这些目标需要更高的温度才能使强 RNA 二级结构变性。
规格
| 说明 | 55C MMLV-RT 可在高达 60°C 的温度下使用，能降低 RNase H 的活性并提高热稳定性，从而熔化 RNA 中的二级结构区域，提高 cDNA 的产量和对病毒基因组等困难 RNA 靶标的敏感性。 |
| 浓度 | ≥ 200 U/µL |
| 比活度 | ≥ 300,000 U/mg |
| 纯度 | > 95%（SDS-Page 的密度分析） |
| 外观 | 无色透明溶液 |
| 应用 | cDNA 合成、RT-PCR、PCR、两步式 RT-qPCR、一步式 RT-qPCR |
| 样品类型 | 核糖核酸 |
| 演示文稿 | 1 瓶 |
| 存储 | -20 °C |
| 混合稳定性 | 见外标签 |
| DNA 污染 | 在大肠杆菌和小鼠基因组 DNA 特异靶标的 PCR 扩增中未检测到与阴性对照重叠的痕迹。 |
| DNase/RNase 污染 | 未检测到降解 |
目录和手册
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常见问题：55C MMLV-RT
我想从二级结构非常高的病毒 RNA 中生成 cDNA，可以使用 55C MMLV-RT吗？
是的，对于二级结构非常高的 RNA，我们建议使用 55C MMLV-RT，这种恒温反转录酶可在高达 60°C 的温度下使用，从而提高了难以处理的 RNA 目标（如病毒 RNA）的 cDNA 产率，因为这些目标需要更高的温度才能使强 RNA 二级结构变性。
55C MMLV-RT 的 RNase H 是否为负值？
55C MMLV-RT 确实含有 RNase H 的结构域，但它已经失活，因此检测不到 RNase H 的活性。
在进一步下游处理之前，是否应该用 RNase H 处理 cDNA？
如果要进行 RT-PCR 或 RT-qPCR，则不需要这样做，因为 cDNA 合成后的 RNA:DNA 双链在 PCR 反应开始的 95°C 变性步骤中会融化。对于较大片段的克隆，RNase H 处理可能会有所帮助。
55C MMLV-RT 如何灭活？
可通过添加 EDTA 等螯合剂或加热至 70°C 或更高温度 10 分钟来灭活逆转录酶。
55C MMLV-RT 可以用于长转录本吗？
55C MMLV 可用于温度高达 60°C 的第一链 cDNA 合成，从而提高了特异性和产量，并可生成长达 12 kb 的 cDNA。
MMLV-RT 是否需要底漆？
是的，为了启动反转录，MMLV-RT 反转录酶需要引物与其 RNA 模板上的互补序列结合，作为合成新链的起点。对于一般的 cDNA 合成，随机六聚体引物和寡聚（dT）引物既可单独使用，也可混合使用。对于 RT-PCR 和 RT-qPCR，应使用基因特异性引物。
55C MMLV-RT 的错误率是多少？
基于 55C MMLV 的反转录酶的错误率约为 4.8 ×10-5。
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