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说明
粪便标本中的 PCR 抑制剂（如胆盐、多糖、血素和分解物质）对开发可直接扩增 DNA 或 RNA 的检测方法构成了挑战。此外，由于粪便的高度复杂性和异质性，样本制备传统上需要去除样本中可能存在的干扰物质，如食物残渣、微生物、脱落的上皮细胞和粘液。风干型直接 DNA qPCR 和 RNA/DNA qPCR 粪便混合物专为直接对粪便样本进行 qPCR/RT-qPCR 分析而设计，只需对样本进行最少的处理。混合物中含有经过优化的混合添加剂，可消除抑制剂的影响，同时保持患者样本的质量和完整性。随着对快速、无创胃肠道疾病检测需求的增加，周转时间短、灵敏度高和保质期长成为重要的突出特点。
如果您正在开发寄生虫、病毒、细菌等传染病检测方法，或炎症性肠病、胃癌或结肠癌筛查检测方法，可风干的直接 DNA qPCR 和 RNA/DNA qPCR 粪便混合液将加快您的检测开发时间。这种混合物只需添加引物和探针，就能制成液体或常温稳定的检测试剂盒，并可在实验室烘箱中干燥，从而避免了昂贵的冻干处理。
目录和手册
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常见问题：风干分子检测的重要原则
我可以使用 Lyo-Ready 混合料进行风干吗？
不，风干需要特定的稳定剂、辅料和防腐剂，与冻干所需的不同。
是否可以调节烘箱温度，高温是否会损坏聚合酶或反转录酶？
是的，我们建议针对每种新的检测配方（包括引物和探针在内的混合物）、所用容器和批量大小优化烘箱温度和干燥时间。干燥温度过高可能会影响混合液及其成分（包括酶）的完整性。
如何知道干燥是否完成？
理想情况下，应从 Air-Dryable™ 1-step RT-qPCR 混合液 (MDX095) 中去除 70% 的水分，从 Air-Dryable™ 混合液 (MDX082) 中去除 95% 的水分。然而，最佳水分损失需要针对每种检测进行优化。水分保留过多可能会影响化验的保质期，而过度干燥则会使混合物难以复水并导致性能下降。水分损失可通过比较容器中初始湿混合物与干混合物的重量来计算（更多信息请参阅基本工作流程）。请注意，风干物料必须在干燥循环后立即包装。
给风干的混合物补水容易吗？是否需要涡流？
加入样本后，风干的混合液会在几秒钟内重新水化。我们建议在可能的情况下，在进行反应前轻轻摇晃/混合容器，使反应混合物重新悬浮，或者在加入病人样本时混合溶液。
在比较再水化干混料和湿混料的性能时，为什么有时会看到较低的 Ct 值？
如果混合物过度干燥，酶的完整性就会受到影响。从概念上讲，混合物的理想 “干燥度 “是在不损失检测性能的情况下达到的最高水分损失百分比。如果干混合物的 Ct 值低于可比较的湿混合物，则说明混合物已过度干燥，需要进一步优化。
不同的探针是否会影响混合液风干后的检测性能？
我们没有观察到荧光团类型（Cy5、FAM、JOE 或 ROX）对风干后混合物的性能有任何影响。
烤箱中风扇的空气循环是否会造成污染？
我们在风干过程中没有观察到任何污染，但我们建议采用良好的实验室清洁方法，以尽量减少可能的环境污染。例如，进行表面清洁或为烘箱干燥、qPCR 反应设置和分析分配单独的位置。此外，我们还建议按照制造商提供的清洁说明维护烘箱。
风扇空气会不会在干燥过程中将一个试管中的底漆/探针痕迹带到另一个试管中？
我们没有观察到风扇强制烘箱干燥过程中的任何交叉污染。由于混合液位于容器底部，因此孔与孔之间不太可能发生交叉污染。此外，根据良好生产规范，我们不鼓励在同一烘干周期内对两种不同类型的化验进行烘干。
必须使用 8 孔 PCR 管条吗？
也可以使用其他容器，如平板、小瓶或各种微芯片，但每个容器/测定的干燥条件都需要优化。一旦确定了理想的条件和参数，就需要在验证和放大过程中进行验证。
您有推荐的烤箱清单吗？
我们建议使用具有对流、风扇或真空功能的精密干燥箱（温度均匀度为 +/- 1.5°C）。在测试中，我们使用的是 Memmert UF260Plus 烤箱，风扇和气门设置分别为 100% 和 20%。请注意，不同的烤箱会有不同的规格和可调参数，需要根据您的测定、反应体积、容器类型、批量大小、相对湿度和海拔高度进行优化。
如果水分损失不足，我是否可以将试管放回烤箱中进行更长时间的培养，或者如果水分损失过多，是否可以加水？
如果第一次尝试不成功，没有提供正确的失水值，我们不建议将试管放回烘箱中继续干燥或加水。我们建议重新开始实验，以便控制所有变量，使其具有可重复性。此外，我们也不建议在干燥过程中打开炉门，除非是以可控的方式打开，并将其作为今后工序的一部分。
干燥箱所在环境湿度和温度的波动是否会影响干燥协议，从而导致水分损失超出 70% 的范围？
与冻干的效果不同，风干对水分损失没有环境影响。
能否在同一干燥循环中使用不同类型的容器和/或不同的反应体积进行测试？
我们建议执行不同的干燥周期，以测试改变容器类型、反应体积、引物/探针和批量大小等任何检测变量的效果。这将确保条件和结果的可重复性。
天平是否需要放在烤箱旁边以便快速称量？
不，天平不一定要放在烤箱旁边，只需将容器从烤箱中取出后关上，然后到天平前（即使在不同的房间）进行测量即可。
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