Meridian 风干 qPCR 和 RT-qPCR 基质混合液
- 为低拷贝数目标创建超灵敏的多重 qPCR 检测。
- 不含甘油的混合物预配有专门的混合辅料，可与空气干燥相容。
- 对纯化过程中残留的 PCR 抑制剂具有很高的耐受性，从而提高了重现性。
- 可湿用，也可烘干，用于开发环境温度稳定的检测方法。
风干后酶活性完全恢复
在 10 倍稀释的小鼠 RNA 模板上比较了湿法（红色）和风干法（蓝色）的Air-Dryable™1-Step RT-qPCR 混合液的活性。与新鲜制备的湿混合物相比，风干混合物的活性和灵敏度在检测限内没有任何下降。
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说明
分子诊断检测正逐步转向干燥格式。这样做有几个好处，包括环境温度运输和储存、延长保质期、减少操作步骤和潜在错误以及增加样本量的灵活性。不过，为了与空气或烘箱干燥兼容，酶制剂必须不含甘油，并包含能在混合物暴露于较高温度时对其进行保存的特殊辅料。
Air-Dryable™qPCR 混合液（4x）可用于开发多重分子诊断检测，实现目标 DNA 的高灵敏度检测；而 Air-Dryable™1-Step RT-qPCR 混合液（4x）可用于开发 RNA 和 DNA 目标的多重分子诊断检测。风干不会影响检测的特异性或重现性，但增加了添加样品量的灵活性，提高了灵敏度，也使其成为微流控 qPCR 和护理点平台的理想选择。
规格
| 产品描述 | 不含甘油的 qPCR 和 RT-qPCR 混合液，含有 Taq 聚合酶、逆转录酶、反应缓冲液、dNTPs、MgCl2 和风干兼容辅料，是开发常温多重分子检测的理想之选。 |
| 浓度 | 4x |
| 外观 | 无色透明溶液 |
| 热启动 | 抗体介导 |
| 应用 | 基于探针的实时 PCR、两步式 RT-qPCR、一步式 RT-qPCR |
| 样品类型 | cDNA、粗制或纯化 RNA 和/或 DNA |
| 演示文稿 | 1 瓶 |
| 存储 | -20 °C |
| 混合稳定性 | 见外标签 |
| 检测稳定性 | 在环境温度下风干后可保存 24 个月 |
| 一致性 | 测试样本和参照样本之间的 ± 0.5 Ct 差异 |
| DNase/RNase 污染 | 未检测到降解 |
目录和手册
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常见问题：可风干的 qPCR 和 RT-qPCR 母液混合物
qPCR 效率低的原因是什么？
标准 10 倍稀释曲线的斜率表示 qPCR 效率。qPCR 的效率应在 90-110% 之间（-3.58 ≥ 斜率 ≥ -3.1）。如果效率大于 100%，说明样品和试剂的移液不准确；如果效率小于 100%，说明样品中可能含有 PCR 抑制剂，或者 qPCR 引物和/或探针的设计不够理想。
使用一步法还是两步法的优势是什么？
一步反应
– 准确表示目标拷贝数
– 简单快速
– 移液步骤更少（减少可能出现的错误和污染）
– 高通量筛选的最佳选择
– 只需重复运行几项检测时的最佳方法
– 可在单孔中完成相关基因和对照的多重 qPCR、
两步反应
– 为独立 RT 和 qPCR 优化的两种缓冲液
– 灵敏度高
– 由于可使用随机引物和寡聚 d(T)，因此可能更有效
– 可储备 cDNA 以定量检测多个目标
– 建议在使用一定量的起始材料进行反应时使用
因此，分子诊断检测通常采用一步式工作流程。如果要对同一起始材料进行多次检测，或需要将 cDNA 存档，则最好采用两步 RT-qPCR。
风干混合物和液体混合物的反应条件是否相同？
是的，反应条件是相同的，它们会产生相同的 Ct 值，即使是多重 qPCR 检测也是如此。这意味着，如果不想干燥，可以使用液体混合物来创建 SOP，之后如果需要干燥（例如提高灵敏度），可以更新 SOP 以进行烘箱干燥，而不需要编写全新的 SOP。
哪些探针可用于定量 PCR？
目前已开发出许多基于荧光 qPCR 引物和探针的化学试剂，不同的商业供应商也可提供这些试剂用于分子诊断检测，其中最常用的两种试剂是：
– 水解（TaqMan）探针。使用水解探针的主要优点是特异性高、信噪比高，并能进行多重 qPCR 反应。缺点是探针的初始成本较高。
– 分子信标。分子信标具有高度特异性，可用于多重扩增，如果目标序列与信标序列不完全匹配，则不会发生杂交和荧光。与水解探针不同，分子信标在扩增过程中会发生位移，但不会被破坏，必要时可用于熔融曲线分析。分子信标的主要缺点是设计困难，需要有足够强的稳定发夹茎，使分子不会自发折叠成非发夹构象，但又不能太强，否则可能无法与目标物正确杂交。
Air-Dryable™ qPCR 和 RT-qPCR 混合母液能否用于粗样品？
Air-Dryable™ qPCR 和 RT-qPCR 混合母液具有一定的抑制剂耐受性，但对于粗裂解液或抑制剂丰富的样品扩增，我们有通用的抑制剂耐受性 qPCR/RT-qPCR 混合母液，为了获得更高的灵敏度，我们有可风干的特定样品（血液、唾液、尿液、粪便和植物）混合母液。
我是否应该在 RT-qPCR 中加入 No-RT 对照反应？
No-RT 对照反应可用于确定扩增样本中可能存在的基因组 DNA 时可能出现的问题。但是，许多 RNA 转录本的丰度较低，对于这些转录本，如果引物组不跨越外显子-外显子连接，建议进行 No-RT 对照反应。如果引物确实跨越了外显子连接，或者基因组 DNA 不可能干扰（例如在检测样本中的 RNA 病毒时），则不需要进行 No-RT 对照。
风干混合物在环境温度下能稳定多久？
在有引物和探针或没有引物和探针的情况下风干后，Air-Dryable™ qPCR 和 RT-qPCR 混合母液在环境温度（17 – 23 °C）下至少可稳定 24 个月。再水化后，检测的重现性、灵敏度和稳健性将与新制成的液体混合物相同，使混合物成为床旁分子诊断检测和微流控 qPCR 设备的理想选择。
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