Meridian 快速 1 步 RT-qPCR 混合液
- 创建超灵敏 RT-qPCR 检测，为低拷贝数 RNA 目标提供可重复的结果
- 强大的配方可在快速循环条件下提供一致、可靠的一步式 RT-PCR 性能
- 最大限度地减少非特异性扩增，提高检测灵敏度和可靠性
- 效率高，在多重 qPCR 检测中表现出色
对十倍序列稀释的 RNA 目标物进行快速、单倍（红色）和多重 qPCR（蓝色
用四种不同探针扩增 10 倍序列稀释的人类 cDNA；包括单重反应（蓝线）和四重反应（红线显示的是与单重反应相同的引物）。运行了五个重复（10 分钟 45°C，然后 2 分钟 95°C，45 个循环 95°C 5s，20°C 10s），结果表明单重反应和多重反应都具有高灵敏度、出色的重现性和 Ct 值，而且不会降低多重反应通常会出现的效率。
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说明
快速一步式 RT-qPCR 混合液是一种一步式 RT-PCR 母液，采用高度优化的缓冲液化学成分、热启动 DNA 聚合酶和反转录酶，可快速、高效、可靠地扩增低拷贝 RNA 靶标，并在单管中进行高灵敏度、可重现的一步式 RT-qPCR。它具有高处理性和稳健性，在单倍和多倍 qPCR 检测中都能提供出色的结果，在快速热循环条件下具有卓越的检测性能，可在一天内以最高的可信度运行更多的样品，是高通量检测的理想选择。
规格
| 说明 | 缓冲液化学、PCR 增强剂和稳定剂方面的最新进展，加上热启动聚合酶、dNTPs 和MgCl2以及单独的逆转录酶和 RNase 抑制剂，可在快速热循环条件下获得重现性高、结果准确的检测结果，是自动化高通量系统的理想之选。 |
| 浓度 | 2x |
| 外观 | 无色透明溶液 |
| 热启动 | 抗体介导 |
| 应用 | 基于探针的一步式 RT-qPCR |
| 样品类型 | 核糖核酸 |
| 演示文稿 | 3 瓶 |
| 存储 | -20 °C |
| 混合稳定性 | 见外标签 |
| 一致性 | 测试样本和参照样本之间的 ±0.5 Ct 差异 |
| DNA 污染 | 在大肠杆菌和小鼠基因组 DNA 特异性目标的 PCR 扩增中未检测到与阴性对照重叠的痕迹。 |
| DNase 污染 | 检测不到降解 |
目录和手册
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常见问题：快速 1 步 RT-qPCR 混合液
什么是一步式 qPCR 和两步式 qPCR？
在一步式 qPCR 或反转录 qPCR 中，cDNA 合成和 qPCR 在一个反应管中进行。在两步式 qPCR 中，cDNA 在一个反应管中合成，然后将等分的 cDNA 用于随后的 RT-qPCR 实验。
使用一步式 RT-PCR 混合液有什么好处？
– 准确反映目标拷贝数
– 高通量筛选的最佳选择
– 简单快速
– 移液步骤更少（减少可能出现的错误和污染）
– 只需重复运行几项检测时的最佳方法
– 可在单孔中利用同一 RNA 样品对相关基因和对照进行多重 qPCR 检测
一步法反应还有其他一些优点，包括样品处理有限和减少工作台时间，这有助于减少反转录和 qPCR 步骤之间的移液错误和交叉污染。这种方法设置快捷，当您只扩增几个感兴趣的基因时，可轻松处理多个 RNA 样品（尤其是使用液体处理机器人时）。因此，它是高通量筛选实验室的理想选择，因为在这种实验室中，只需使用既定的反应条件重复进行几次反转录 qPCR 检测，而且还能在同一 RNA 样品的单孔中完成相关基因和对照基因的多重 qPCR 检测。
使用一步式 RT-PCR 混合液有哪些注意事项？
基因特异性引物需要在一个试管中生成 cDNA 并进行后续扩增，但这减少了实验差异，因为两个酶反应都是在相同条件下进行的，这使得一步式 qPCR 具有很高的可重复性。
一步式 RT-PCR 需要仔细评估，以防止引物二聚体的形成，因为在 RT 反应和 qPCR 循环的低温条件下引物都会存在。这一点在多重 qPCR 检测中尤为重要。
如何避免在 RNA 样品中扩增基因组 DNA？
有几种方法可以避免反转录 qPCR 的基因组污染。首先，在大内含子上下游的外显子中设计正向和反向引物。
其次，对于缺乏内含子或基因组结构未知的基因，用 DNase I 预处理 RNA 以去除基因组 DNA。
你们是否销售使用 SYBR Green 等插层染料的 RT-qPCR 混合液？
不，插层染料会与所有 DNA 结合，这意味着它们不能用于多重 qPCR，因为无法区分不同的扩增子，而不同的染料可用于不同扩增子的探针。这也使得基于探针的系统更具特异性；只检测感兴趣的基因，甚至可以区分具有微小差异（如 SNP 或突变）的相似序列。一般来说，探针检测需要的优化更少，而且可用于多重 qPCR。
在一步式 RT-PCR 中，是否最好在 RT 步骤中使用高温？
当模板 RNA 具有稳定的二级结构和进行多重 qPCR 时，在反转录反应中将反应时间延长至 20 分钟和/或将温度升高（高达 48°C）会有好处。如果 RNA 含有大量稳定的二级结构（常见于 RNA 病毒），我们建议使用带有恒温反转录酶的 RT-qPCR 混合液，如 Inhibitor-Tolerant RT-qPCR Mix (MDX016)，其中反转录反应时间可延长至 55°C。
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