Meridian 快速 qPCR 混合液
- 创建超灵敏 qPCR 检测，为低拷贝数目标提供可重现的结果
- 强大的配方可在快速循环条件下提供一致、可靠的 qPCR 性能
- 最大限度地减少非特异性扩增，提高检测灵敏度和可靠性
- qPCR 效率高，在多重 qPCR 检测中性能卓越
十倍序列稀释模板 DNA 的标准 qPCR（黑色）和快速 qPCR（蓝色
使用标准 qPCR 循环条件（2 分钟 @ 95ºC，40 个循环 10 秒 @ 95ºC 和 25 秒 @ 60ºC）和快速循环条件（2 分钟 @ 95ºC，40 个循环 1 秒 @ 95ºC 和 10 秒 @ 60ºC）扩增 DNA 靶标。结果表明，在标准（蓝色）和快速（黑色）qPCR 循环条件下，快速 qPCR 混合液都具有更高的性能和末端荧光。
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说明
快速 qPCR 混合液采用高度优化的缓冲液化学成分和热启动 DNA 聚合酶设计，即使是低丰度目标和稀缺样本也能获得高灵敏度的 qPCR 效率。它具有高处理性和稳健性，可在单复式和多复式 qPCR 检测中提供出色的结果，并在快速热循环条件下具有卓越的检测性能，可在一天内以最高的可信度运行更多的样品，是高通量检测的理想选择。快速 qPCR 混合液有标准 2x 和 5x 两种配方，可提供灵活的反应设置和方案。
规格
| 说明 | 缓冲液化学、PCR 增强剂和稳定剂方面的最新进展，加上热启动聚合酶、dNTPs 和MgCl2，可在快速热循环条件下获得重复性高、准确的检测结果，是自动化高通量系统的理想之选。 |
| 浓度 | 2 倍和 5 倍 |
| 外观 | 无色透明溶液 |
| 热启动 | 抗体介导 |
| 应用 | 基于探针的 qPCR、两步 RT-qPCR |
| 样品类型 | cDNA, DNA |
| 演示文稿 | 1 瓶 |
| 存储 | -20 °C |
| 混合稳定性 | 见外标签 |
| 一致性 | 测试样本和参照样本之间的 ±0.5 Ct 差异 |
| DNA 污染 | 在大肠杆菌和小鼠基因组 DNA 特异性目标的 PCR 扩增中未检测到与阴性对照重叠的痕迹。 |
| DNase 污染 | 检测不到降解 |
目录和手册
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常见问题：快速 qPCR 混合液
qPCR 效率低的原因是什么？
标准 10 倍稀释曲线的斜率表示 qPCR 效率。qPCR 的效率应在 90-110% 之间（-3.58 ≥ 斜率 ≥ -3.1）。如果效率大于 100%，说明样品和试剂的移液不准确；如果效率小于 100%，说明样品中可能含有 PCR 抑制剂，或者 qPCR 引物和/或探针的设计不够理想。
与一步式 RT-qPCR 混合液相比，使用两步式 qPCR 混合液有何优势？
– 为独立 RT 和实时 PCR 优化的两种缓冲液
– 灵敏度高
– 建议在使用一定量的起始材料进行反应时使用
– 由于可以使用随机引物和寡聚 d(T) 引物，因此效率更高
– 可以储存 cDNA 以对多个目标进行定量分析
在进行两步定量 PCR 检测的反转录反应时，可以使用不同的引物策略。随机六聚体引物可与 RNA 的任何部位结合，从而全面覆盖总 RNA（包括核糖体、细菌和病毒 RNA）；寡聚 d(T)n（或锚定寡聚 d(T)n）可与位于转录本末端的 mRNA 的多聚-A 尾部结合、随机六聚体和寡聚 d(T)n 的混合物可降低 cDNA 合成中出现偏差的风险，而特异性引物可与感兴趣的转录本结合，从而获得完整的转录本。
由于可以分别优化 cDNA 和定量 PCR 反应，而且 cDNA 产量较高，两步反应比一步反应灵敏度更高。在对具有挑战性的序列进行多重 qPCR 时，分别优化这些反应的能力也非常有益。
使用两步式 qPCR 混合液有哪些注意事项？
对于两步定量 PCR 来说，使用多个试管意味着它更耗时，对液体处理机器人的适应性更差，因此更难用于高通量
筛选测定。使用多个试管和移液步骤还会使反应面临更大的 DNA 污染风险。
哪些探针可用于定量 PCR？
目前已开发出许多基于荧光 qPCR 引物和探针的化学试剂，并可从不同的商业供应商处获得，包括：
– Hydrolysis (TaqMan) 探针
– Molecular beacon
– Dual hybridization probes
– Eclipse probes
– Amplifluor assays
– Scorpions PCR 引物
– LUX PCR 引物
– QZyme PCR 引物
最常用的两种探针是：
– 水解（TaqMan）探针。使用水解探针的主要优点是特异性高、信噪比高，并能进行多重 qPCR 反应。缺点是探针的初始成本较高。
– 分子信标。分子信标具有高度特异性，可用于多重扩增，如果目标序列与信标序列不完全匹配，则不会发生杂交和荧光。与水解探针不同，分子信标在扩增过程中会发生位移，但不会被破坏，必要时可用于熔融曲线分析。分子信标的主要缺点是设计困难，需要有足够强的稳定发夹茎，使分子不会自发折叠成非发夹构象，但又不能太强，否则可能无法与目标物正确杂交。
你们是否出售使用插层染料（如 SYBR Green）的 qPCR 混合液？
不，插层染料会与所有 DNA 结合，这意味着它们不能用于多重 qPCR，因为无法区分不同的扩增子，而不同的染料可用于不同扩增子的探针。这也使得基于探针的系统更具特异性；只检测感兴趣的基因，甚至可以区分具有微小差异（如 SNP 或突变）的相似序列。一般来说，探针检测需要的优化更少，而且可用于多重 qPCR。
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