Meridian 的低 DNA qPCR 混合液
- 可重复检测低拷贝数模板
- 专有的热启动修饰可最大限度地减少非特异性扩增，提高高通量检测的可靠性
- 技术重复之间结果一致，是多重分析、基因表达分析和基因分型的理想选择
- 从多种类型的样品中可靠、准确地检测 DNA 和 cDNA 靶标
快速循环条件下的灵敏度
使用 Low DNA qPCR 混合液（红色）和另一家供应商的化学热启动 qPCR 混合液（黑色），在快速循环条件下（10 分钟 95°C，然后 40 个循环 95°C 10 秒，60°C 10 秒），对 100 倍稀释的人类 cDNA 进行多重检测。结果表明，在快速循环条件下，Low DNA qPCR mix 比其他供应商的化学热启动 qPCR mix 更灵敏。
说明
Low DNA qPCR 母液包含化学热启动 Taq 聚合酶和高度优化的反应缓冲液，其中含有 dNTPs、MgCl2、稳定剂和 PCR 增强剂。Taq 聚合酶在加入化学热启动前后经过两次纯化，这有助于去除 DNA 聚合酶生产过程中产生的微量 DNA（称为生物负载）。此外，抗体热启动不会产生生物负载，因此非常适合低拷贝数目标以及微生物 DNA 和真菌 DNA 检测试验。
低 DNA qPCR 母液还可用于快速、精确和高重复性的序列变异基因分型，包括基因位点，提供更严格和更特异的等位基因特异性探针结合，更广泛和更清晰地分离等位基因群。
规格
| 说明 | 结合了缓冲液化学和 PCR 增强剂聚合酶、dNTPs 和 MgCl2 的最新进展。低 DNA 背景和严格的热启动特性是低拷贝细菌目标 qPCR 的理想选择，可避免细菌或真菌目标的假阳性扩增。 |
| 浓度 | 2x |
| 外观 | 无色透明溶液 |
| 应用 | 基于探针的实时 PCR、两步 RT-qPCR |
| 样品类型 | cDNA, DNA |
| 演示文稿 | 1 瓶 |
| 存储 | -20 °C |
| 混合稳定性 | 见外标签 |
| 一致性 | 测试样本和参照样本之间的 ±0.5 Ct 差异 |
| DNA 污染 | 在大肠杆菌和小鼠基因组 DNA 特异性目标的 PCR 扩增中未检测到与阴性对照重叠的痕迹。 |
| DNase 污染 | 检测不到降解 |
目录和手册
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常见问题：低 DNA qPCR 混合液
化学热启动 DNA 聚合酶有哪些优势和注意事项？
使用化学热启动 DNA 聚合酶时，聚合酶与化学基团共价连接，以阻止酶在室温下的活性。
优点
– 比抗体热启动方法更严格，因此即使在室温下长时间也不会有活性，最大限度地减少了非特异性扩增
– 生物负荷低，因为它不含动物和细菌源成分
考虑因素
– 聚合酶完全活跃所需的激活时间较长
哪些探针可用于定量 PCR？
目前已开发出许多基于荧光 qPCR 引物和探针的化学试剂，不同的商业供应商也可提供这些试剂用于分子诊断检测，其中最常用的两种试剂是：
– 水解（TaqMan）探针。使用水解探针的主要优点是特异性高、信噪比高，并能进行多重 qPCR 反应。缺点是探针的初始成本较高。
– 分子信标。分子信标具有高度特异性，可用于多重扩增，如果目标序列与信标序列不完全匹配，则不会发生杂交和荧光。与水解探针不同，分子信标在扩增过程中会发生位移，但不会被破坏，必要时可用于熔融曲线分析。分子信标的主要缺点是设计困难，需要有足够强的稳定发夹茎，使分子不会自发折叠成非发夹构象，但又不能太强，否则可能无法与目标物正确杂交。
低 DNA qPCR 混合液能否用于粗样品？
低 DNA qPCR 混合液具有一定的抑制剂耐受性，但对于从粗裂解液或抑制剂丰富的样品中进行扩增，我们有通用的抑制剂耐受性 qPCR 混合液，而对于更高的灵敏度，我们有特定样品（血液、唾液、尿液、粪便和植物）混合液。
Low DNA qPCR 混合液如何用于基因分型？
基因分型是指确定群体中个体间遗传变异的过程。单核苷酸多态性（SNP）是最常见的遗传变异类型，是特定基因座上的单碱基差异。这些基因型变化可带来积极或消极的表型结果，如植物更强的抗逆性或人类对疾病的易感性。因此，SNP 通常是了解生物体生物学特性的有用标记。基因分型使用两个等位基因特异性探针，探针上有一个碱基错配，SNP 的两端各有一对引物。根据 SNP 位置上出现的碱基，探针在 qPCR 过程中要么不能正确杂交而保持完整，要么正确杂交而被裂解产生信号。由于双标记探针检测是以 PCR 为基础的，因此实施起来相对简单，而且可以通过同时进行多个反应来大幅扩大规模。
基因分型还指拷贝数变异（CNV），这是由于不同基因组中 DNA 片段的拷贝数不同造成的。拷贝数变异是指编码基因的拷贝数变异，可导致对疾病的易感性或抵抗力。这种方法使用两套引物和探针，一套用于没有变化的校准基因，另一套用于被认为拷贝数发生变化的基因。通过比较两种基因的 Ct 值，可以确定拷贝数是否发生了变化以及变化的程度。
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