Meridian 的低 LOD 1 步 RT-qPCR 母液混合物
- 适用于检测极低滴度的纯化 RNA 和 DNA 病毒。
- 效率高，在多重 qPCR 检测中表现出色。
- 防止携带污染。
对 RNA 和 DNA 病毒的检测限（LOD）都很低
使用 Low LOD 1-Step RT-qPCR Mix（低 LOD 1-Step RT-qPCR 混合液）以指定的 IU/mL，在单倍 qPCR 反应中测试了 24 个复制的纯化血液病毒提取物。单倍反应的病毒为 HCV、HIV-1、HIV-2 和 Parvovirus B19。扩增曲线结果表明，Low LOD 1-Step RT-qPCR Mix 可用于低至 5 IU/mL 的 RNA 和 DNA 病毒。
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说明
Low LOD 1-Step RT-qPCR 混合母液包含 Taq DNA 聚合酶、反应缓冲液、dNTP、MgCl2、稳定剂和 PCR 增强剂，以及单独的 RNase 耐受性反转录酶混合液。不过，dNTPs 中的 dTTP 已被 dUTP 取代，因此可加入尿嘧啶 DNA 糖基化酶（UDGase）（MDX054）以去除背景 PCR 产物污染。因此，Low LOD 1-Step RT-qPCR 是开发高灵敏度 RT-qPCR 诊断测试的理想选择，例如用于检测血库或移植病毒检测中含量极低的 RNA 和 DNA 病毒。
规格
| 说明 | RT-qPCR 混合液含有 Taq 聚合酶、反应缓冲液、MgCl2和优化的 dNTP/dUTP 混合液，以及单独的反转录酶/RNase 抑制剂混合液，专为严格扩增高结构、低拷贝数的 RNA 和 DNA 靶标而设计。 |
| 浓度 | 2x |
| 外观 | 无色透明溶液 |
| 热启动 | 抗体介导 |
| dUTP | 通过反相高效液相色谱分离检测 dUTP 的存在 |
| 应用 | 基于探针的一步式 RT-qPCR |
| 样品类型 | RNA 和 DNA |
| 演示文稿 | 2 瓶 |
| 存储 | -20 °C |
| 混合稳定性 | 见外标签 |
| 一致性 | 测试样本和参照样本之间的 ±0.5 Ct 差异 |
| DNase/RNase 污染 | 未检测到降解 |
目录和手册
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常见问题：低 LOD 1 步 RT-qPCR 混合液
什么是一步式 RT-qPCR 和两步式 qPCR？
在一步式 RT-qPCR 或反转录 qPCR 中，cDNA 合成和 qPCR 在一个反应管中进行。在两步式 qPCR 中，cDNA 在一个反应管中合成，然后将等分的 cDNA 用于随后的 qPCR 实验。
使用一步式 RT-PCR 混合液有哪些优势？
– 准确反映目标拷贝数
– 简单快速
– 移液步骤更少（减少可能出现的错误和污染）
– 高通量筛选的最佳选择
– 只需重复运行几项检测时的最佳方法
– 可在单孔中使用同一 RNA 样品对相关基因和对照进行多重 qPCR 检测
一步法反应还有其他一些优点，包括样品处理有限和减少工作台时间，这有助于减少反转录和 qPCR 步骤之间的移液错误和交叉污染。这种方法设置快捷，当您只扩增几个感兴趣的基因时，可轻松处理多个 RNA 样品（尤其是使用液体处理机器人时）。因此，它是高通量筛选实验室的理想选择，因为在这种实验室中，只需使用既定的反应条件重复进行几次反转录 qPCR 检测，而且还能在同一 RNA 样品的单孔中完成相关基因和对照基因的多重 qPCR 检测。
使用一步式 RT-PCR 混合液有哪些注意事项？
基因特异性引物需要在一个试管中生成 cDNA 并进行后续扩增，但这减少了实验差异，因为两个酶反应都是在相同条件下进行的，这使得一步式 qPCR 具有很高的可重复性。
一步式 RT-PCR 需要仔细评估，以防止引物二聚体的形成，因为在 RT 反应和 qPCR 循环的低温条件下引物都会存在。这一点在多重 qPCR 检测中尤为重要。
如何在 RT-qPCR 中使用尿嘧啶 DNA 糖基化酶？
qPCR 污染包括来自其他样本的交叉污染、来自实验室其他地方的污染以及来自先前 qPCR 实验中使用的扩增产物和引物的携带污染。后者是导致 qPCR 出现假阳性结果的主要原因。防止污染很困难，因此必须制定实验室程序，确保一次检测的 DNA 不会在后续检测中再次扩增。
Uracil DNA 糖基化酶可特异性地降解已通过 qPCR 过程并含有 dUTP 的产物，使用于扩增的原生核酸模板保持完整。Uracil DNA 糖基化酶的激活是 qPCR 的第一步，在 50°C 孵育 2 分钟，然后在热启动激活过程中温度升至 95°C 时 Uracil DNA 糖基化酶就会变性。
UDG 和 UNG 有什么区别？
尿嘧啶-DNA 糖基化酶（UDG 或 UDGase）是由六个亚家族组成的酶家族。家族 I 的 UDGase 酶被称为 UNG（尿嘧啶-N-糖基化酶基因），因此没有区别，UDG 和 UNG 这两个词通常可以互换使用，因为它们在 qPCR 中具有相同的功能，即防止携带 qPCR 污染。
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