Meridian 的 Lyo-Ready 1 步 RT-qPCR 病毒母液混合物
- 专为扩增具有高二级结构的 RNA 病毒而优化（逆转录酶在 55-60 °C 时仍保持活性）
- 反应动力学速度极快--是多重 qPCR 检测和低拷贝数目标的理想选择
- 不含甘油的混合物预配有专门的冻干辅料混合物，可冻干成珠状或饼状
- 混合物可作为湿混合物使用，也可冻干后用于快速、高度可重现、环境温度稳定的分子诊断检测
DNA 模板（红色）和 RNA 模板（蓝色）的高效率和高灵敏度
在一次多重 RT-qPCR 检测中，从灭活的粗病毒裂解液中扩增轮状病毒 A（dsRNA）和腺病毒（dsDNA）。结果表明，DNA 和 RNA 病毒的扩增效率和灵敏度都很高，证明 Lyo-Ready 1-Step RT-qPCR Virus Mix 有能力从单一样品中同时检测低拷贝数的 RNA 和 DNA 目标物。
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说明
分子诊断检测正逐步转向冻干格式。这样做有几个好处，包括常温运输和储存、延长保质期、减少操作步骤和潜在错误以及增加样品量的灵活性。不过，为了与干燥兼容，酶制剂必须不含甘油，并含有专门的辅料，以便在混合物暴露于冷冻、真空和脱水等各种条件时对其进行保存。
Lyo-Ready 1-Step RT-qPCR Virus Mix 是 2x RT-qPCR 混合母液，可用于开发基于 RNA 和 DNA 的分子诊断检测，它包含单独的 lyo 兼容 MMLV-RT 和酶稀释缓冲液。Lyo-Ready 1-Step RT-qPCR Virus Mix 反转录酶也具有恒温性，并针对具有高二级结构的 DNA 或 RNA 病毒的扩增进行了优化（反转录酶在 55-60 °C 时仍保持活性）。
规格
| 说明 | 不含甘油的混合母液，含有 Taq 聚合酶、RNase 抑制剂、反应缓冲液、dNTP、MgCl2 和溶菌酶，以及单独的反转录酶和稀释缓冲液。经过优化，可用于扩增提取或完整病毒样本中高二级结构的 RNA。 |
| 浓度 | 2x |
| 外观 | 无色透明溶液 |
| 热启动 | 抗体介导 |
| 应用 | 基于探针的实时 PCR、两步式 RT-qPCR、一步式 RT-qPCR |
| 样品类型 | RNA 和/或 DNA |
| 演示文稿 | 3 瓶 |
| 存储 | -20 °C |
| 混合稳定性 | 见外标签 |
| 检测稳定性 | 冻干后在环境温度下可保存 24 个月 |
| 一致性 | 测试样本和参照样本之间的 ±0.5 Ct 差异 |
| DNase/RNase 污染 | 未检测到降解 |
目录和手册
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常见问题：Lyo-Ready 1 步 RT-qPCR 病毒混合液
RT-qPCR 效率低的原因是什么？
标准 10 倍稀释曲线的斜率表示 RT-qPCR 的效率。RT-qPCR 的效率应在 90-110% 之间（-3.58 ≥ 斜率 ≥ -3.1）。如果效率大于 100%，则表明样品和试剂的移液不准确；如果效率小于 100%，则表明您的样品可能含有 PCR 抑制剂，或者您的 RT-qPCR 引物和/或探针设计可能不理想。
使用一步混合法有哪些优势和注意事项？
一步反应
– 准确表示目标拷贝数
– 简单快速
– 移液步骤较少（减少可能出现的错误和污染）
– 高通量筛选的最佳选择
– 只需重复运行几项检测时的最佳方法
– 可在单孔中完成相关基因和对照的多重 qPCR、
注意事项
– 通常灵敏度较低，因为无法分别优化两个反应
– RT 步骤难以排除故障
– 没有 cDNA 储存
因此，在分子诊断检测中，不需要存档 cDNA 的一步式工作流程通常受到青睐。
冻干和液体混合物的反应条件是否相同？
是的，反应条件是相同的，即使是多重 RT-qPCR 检测，它们也会产生相同的 Ct 值。这意味着，如果您不想冻干，可以使用液体混合物来创建 SOP，之后如果需要冻干（例如提高灵敏度），可以更新 SOP 以进行冻干，而不需要编写全新的 SOP。
哪些探针可用于 RT-qPCR 反应？
目前已开发出许多基于荧光 qPCR 引物和探针的化学试剂，不同的商业供应商也可提供这些试剂用于分子诊断检测，其中最常用的两种试剂是：
– 水解（TaqMan）探针。使用水解探针的主要优点是特异性高、信噪比高，并能进行多重 RT-qPCR 反应。缺点是探针的初始成本较高。
– 分子信标。分子信标具有高度特异性，可用于多重扩增，如果目标序列与信标序列不完全匹配，则不会发生杂交和荧光。与水解探针不同，分子信标在扩增过程中会发生位移，但不会被破坏，必要时可用于熔融曲线分析。分子信标的主要缺点是设计困难，需要有足够强的稳定发夹茎，使分子不会自发折叠成非发夹构象，但又不能太强，否则可能无法与目标物正确杂交。
Lyo-Ready 1-Step RT-qPCR 病毒混合液能否用于粗样品？
Lyo-Ready 1-Step RT-qPCR 病毒混合液具有抑制剂耐受性，但为了获得更高的灵敏度，我们还有针对特定样本（血液、唾液、尿液和粪便）的混合液。
我是否应该在 RT-qPCR 中加入 No-RT 对照反应？
No-RT 对照反应可用于确定扩增样本中可能存在的基因组 DNA 时可能出现的问题。但是，许多 RNA 转录本的丰度较低，对于这些转录本，如果引物组不跨越外显子-外显子连接，建议进行 No-RT 对照反应。如果引物确实跨越了外显子连接，或者基因组 DNA 不可能干扰（例如在检测样本中的 RNA 病毒时），则不需要进行 No-RT 对照。
冻干混合物在环境温度下能稳定多长时间？
Lyo-Ready™ 1-Step RT-qPCR 病毒混合物在有引物和探针或没有引物和探针的情况下冻干后，在环境温度（17 – 23 °C）下至少可稳定保存 24 个月。重新水化后，检测的重现性、灵敏度和稳健性将与新制成的液体混合物相同，使混合物成为床旁分子诊断检测和微流控 qPCR 设备的理想选择。
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