Meridian 的 Lyo-Ready Direct DNA 和 RNA/DNA LAMP 血液混合母液
- 利用全血、血浆和血清样本开发超灵敏的 LAMP 血液检测方法。
- 去掉核酸提取环节，缩短得出结果的时间。
- 只需添加引物和探针，即可简化 POC 血液检测的开发。
- 可湿用或冻干使用，是开发血液病原体和液体活检检测的理想选择。
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说明
血液是实验室诊断检测最常用的标本之一，可用于诊断细菌和病毒感染、癌症、心血管疾病和糖尿病等代谢性疾病。然而，全血标本、血清和血浆中含有许多固有的 PCR 抑制剂，包括免疫球蛋白 G、血红蛋白、乳铁蛋白和白细胞 DNA。此外，用于稳定血样的抗凝剂（如 EDTA、柠檬酸盐或肝素）中也可能含有 PCR 抑制剂。等温扩增（如 LAMP）对抑制剂有很强的耐受性，因此非常适合用于医疗点（POC）检测，其简单的工作流程可为临床诊断提供快速、灵敏和可靠的结果。
Lyo-Ready Direct DNA LAMP Blood 和 Lyo-Ready RNA/DNA LAMP Blood 混合液将更高的耐受性与快速、稳健的等温扩增结合在一起，可使用粗加工的全血、血浆或血清样本进行高灵敏度的直接检测。这种混合物设计独特，可以克服更高浓度的抑制剂，因此不需要 DNA 或 RNA 纯化步骤来浓缩和纯化病人样本。反应动力学速度极快，因此能更快地得出结果，并具有卓越的扩增灵敏度和特异性。此外，4 倍浓缩的混合母液采用了冻干优化的冻干敷料，可进行环境温度稳定的检测，是 POC 血液检测的理想选择。
目录和手册
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常见问题：LAMP 血液检测
等温扩增与 qPCR 有何不同？
环路介导等温扩增与 qPCR 的主要区别在于，在环路介导等温扩增中，扩增是在单一恒定温度下实现的，而在 qPCR 中，扩增需要在热循环仪上的多个温度之间循环。环路介导等温扩增使用的聚合酶具有很高的链置换活性，如 Bst DNA 聚合酶，而不是在高温下融化 DNA 链。由于这些聚合酶不需要多个温度，它们可以在不到一个小时的时间内扩增一个目标，在某些情况下甚至只需 10 分钟。
与其他样本类型相比，使用血液的优势是什么？
血液中含有大量有关机体健康状况的信息，可用于评估器官功能、检测蛋白质、核酸、代谢物、传染病，还可用于诊断癌症（液体活检）、心脏病和糖尿病。就 POC 血液检测而言，它是一种简单、易用（低侵入性）的健康监测方法。
全血中存在哪些 LAMP 抑制剂？
免疫球蛋白 G 是血液中 LAMP 的主要抑制剂，因为它能与单链基因组 DNA 结合，降低全血检测的灵敏度。血液中的另外两种主要抑制剂是血红蛋白和乳铁蛋白，它们会影响 Bst DNA 聚合酶的活性，从而降低扩增效率。血红蛋白和血红蛋白也会导致一些荧光淬灭，尤其是 FAM，不过这不会影响检测结果的时间（TTR）。此外，用于稳定血样的抗凝剂（如 EDTA、柠檬酸盐或肝素）中也可能存在抑制剂。
LAMP 检测中最多可使用多少全血？
我们在混合液中最多使用 20% 的全血，浓度过高会导致溶液变得粘稠，难以操作。
混合料干燥后多久可以稳定使用？还是需要在干燥后立即使用？
如果正确存放在密封袋中，它在环境温度下的稳定性可达 2 年。
能否使用这些试剂盒检测血清中的游离细胞 RNA/DNA？
是的，Lyo-Ready LAMP 血液试剂盒可用于检测 cfDNA 和 cfRNA。
如果要检测革兰氏阳性细菌的 DNA，是否需要预处理？
是的，您可能需要对血液进行预处理，以释放革兰氏阳性细菌的 DNA。在某些情况下，热休克就足够了，但这取决于所检查的细菌。
使用 DNA 特异性产品和 DNA/RNA 产品时，DNA 的性能有何不同？
我们认为这两种混合物在性能上没有区别，因此我们将 Lyo-Ready Direct RT-LAMP 血液混合物称为 Lyo-Ready Direct RNA/DNA LAMP 血液混合物，因为它可以同时用于两种用途。
LAMP 混合液可用于多重检测吗？
是的，可以使用不同的引物和探针来创建多重 LAMP 全血检测，但由于每个序列需要三套引物，因此设计和优化起来比较困难。
混合母液是否需要更改 LAMP 协议，或者是否与我当前的设置兼容？
它们与标准等温扩增方案兼容，但可能需要对血液检测所需的血浆或血清样本量进行一些优化。
是否需要洗脱干血斑，还是可以直接使用？
应该用水或 TE 缓冲液洗脱。
冻干混合物和液体混合物的反应条件是否相同？
是的，Lyo-Ready Direct DNA LAMP 血液和 Lyo-Ready Direct RNA/DNA LAMP 血液可以作为液体混合物使用，也可以冻干后储存长达 24 个月，无需改变反应条件，而且冻干/常温储存不会影响检测灵敏度。
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