Meridian 的 Lyo-Ready Direct DNA 和 RNA/DNA qPCR 血液混合母液
- 使用全血、血清或血浆创建超灵敏的多重直接血液 qPCR 检测。
- 取消核酸提取步骤，缩短从样本到结果的工作流程，从而简化血液定量 PCR 检测的开发过程。
- 已通过血液病原体检测和液体活检应用的验证。
- 可以液态形式使用，也可以冻干，用于开发环境温度稳定的检测方法。
对全血和抗凝血剂中发现的抑制剂的耐受性明显提高
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说明
血液是实验室诊断检测最常用的标本之一，可用于评估重要器官（肾脏、肝脏、甲状腺和心脏）的功能，以及诊断细菌和病毒感染、癌症、心血管疾病和糖尿病等代谢性疾病。然而，全血标本、血清和血浆中含有许多固有的 PCR 抑制剂，包括免疫球蛋白 G、血红蛋白、乳铁蛋白和白细胞 DNA。此外，用于稳定血样的抗凝剂（如 EDTA、柠檬酸盐或肝素）中也含有 PCR 抑制剂。传统的方法是在检测前通过 DNA 或 RNA 提取去除这些抑制剂，但这些方法存在很多问题，可能会导致样本丢失，而且不能 100% 有效地去除所有抑制剂。
Lyo-Ready DNA qPCR Blood 是 4 倍速 qPCR 母液，用于开发 DNA 血液检测试剂盒，可从全血、血浆和血清样本中高灵敏地检测目标 DNA。Lyo-Ready RNA/DNA qPCR Saliva 是 4x qPCR 母液，可用于开发全血、血浆和血清样本的 RNA 和 DNA 血液检测。这些混合液专为克服血液样本中的抑制剂而配制，除了添加引物和探针外，无需进一步优化。此外，这些混合物可以湿法或冻干法使用，以制作环境温度稳定的全血检测试剂盒、血浆检测试剂盒或血清检测试剂盒。
目录和手册
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常见问题：qPCR 血液检测
与其他样本类型相比，使用血液的优势是什么？
血液中含有大量有关机体健康状况的信息，可用于评估器官功能、检测蛋白质、核酸、代谢物、传染病，还可用于诊断癌症（液体活检）、心脏病和糖尿病。血液化验是评估和监测健康状况的一种简单易行（低侵入性）的方法。
全血中存在哪些 qPCR 抑制剂？
免疫球蛋白 G 是血液中 qPCR 的主要抑制剂，因为它能与单链基因组 DNA 结合，导致血液定量 PCR 检测中的 Ct 值升高。血液中的另外两种主要抑制剂是血红蛋白和乳铁蛋白，它们会影响 DNA 聚合酶的活性，从而降低扩增效率。血红蛋白和血红蛋白也会导致一些荧光淬灭，尤其是 FAM，但这不会影响 Ct 值。此外，用于稳定血样的抗凝剂（如 EDTA、柠檬酸盐或肝素）中也可能存在抑制剂。
PCR 血液检测中最多可使用多少全血？
我们在混合液中最多使用 20% 的全血，浓度过高会导致溶液变得粘稠，难以操作。
您是否使用突变聚合酶来克服抑制剂？
我们使用自己专有的 Taq 聚合酶和高度优化的缓冲系统来克服抑制作用。
混合料干燥后多久可以稳定使用？还是需要在干燥后立即使用？
如果正确存放在密封袋中，它在环境温度下的稳定性可达 2 年。
能否使用这些试剂盒检测血清中的游离细胞 RNA/DNA？
是的，Lyo-Ready qPCR 血液混合物可用于检测 cfDNA 和 cfRNA。
如果要检测革兰氏阳性细菌的 DNA，是否需要预处理？
是的，您可能需要对血液进行预处理，以释放革兰氏阳性细菌的 DNA。在某些情况下，热休克就足够了，但这取决于所检查的细菌。
使用 DNA 特异性产品和 DNA/RNA 产品时，DNA 的性能有何不同？
我们认为这两种混合物的性能并无差异，因此我们将 Lyo-Ready Direct RT-qPCR 血液混合物称为 Lyo-Ready Direct RNA/DNA qPCR 血液混合物，因为它可同时用于两种用途。
在进行 qPCR 分析之前，是否可以储存含抗凝剂或不含抗凝剂的血液？储存多长时间？温度如何？
它可以冷冻保存，也可以按照缓冲液制造商的说明进行保存。
新的混合母液是否需要更改 PCR 程序，还是与当前设置兼容？
它们与标准循环条件兼容，也可用于快速循环条件，但可能需要根据 qPCR 血液检测所需的血液量进行一些优化。
是否需要洗脱干血斑，还是可以直接使用？
应该用水或 TE 缓冲液洗脱。
冻干混合物和液体混合物的反应条件是否相同？
是的，Lyo-Ready Direct DNA qPCR 血液和 Lyo-Ready Direct RNA/DNA qPCR 血液可作为液体混合物使用，也可冻干保存长达 24 个月，无需改变反应条件，冻干/常温保存不会影响检测灵敏度。
哪种类型的预处理与耐抑制剂血液混合物兼容（洗涤剂、在 PCR 仪器中将酶/血浆混合物预热 95°C 5 分钟？）
我们建议不要使用 Triton，但可以进行热处理。
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