Meridian 的 RT-qPCR 提取对照橙色试剂盒
- 提取对照组与测试样品经过相同的处理过程
- 确认提取步骤是否成功，监测 PCR 抑制剂的共同纯化情况
- 基于探针，专为多重定量 PCR 检测而设计
- 定量 PCR 阳性对照序列独一无二，与任何生物都没有同源性
工作流程
说明
RT-qPCR 提取对照橙包含一个内部对照 RNA 序列，与人工细胞中的任何生物体都没有已知的同源性。在提取 RNA 之前，将 RT-qPCR 提取对照与裂解缓冲液一起加入样品中。提取 RNA 后，在扩增前将对照混合物（含有特定引物和探针（发射波长 = 560nm））加入提取的 RNA 中。检测 RT-qPCR 提取对照可作为 PCR 阳性对照，确认提取、反转录和扩增步骤是否成功，避免误读假阴性结果。
规格
| 说明 | 用于监控从裂解/提取到扩增的 RT-qPCR 检测是否成功，并降低从样本 RNA 中获得假阴性结果的几率。 |
| 浓度 | 25x |
| 外观 | 无色透明溶液 |
| 内部对照 RNA | 胶束中 |
| 对照混合液 | 引物和 CalFluor®Orange 560 标记探针 |
| 应用 | 基于探针的一步式 RT-qPCR |
| 样品类型 | 组织、细胞 |
| 演示文稿 | 3 瓶 |
| 存储温度 | -80 °C |
| 混合稳定性 | 见外标签 |
| 功能性/一致性 | Ct 为 27 – 30。测试结果与历史数据的差异不到 1 Ct。 |
目录和手册
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常见问题：RT-qPCR 提取对照
与其他方法（如测量看家基因、内部对照/尖峰对照）相比，有哪些区别/优势？
人工 RT-qPCR 提取对照在提取过程评估中的优势在于可以验证样品提取过程。RT-qPCR 提取对照产生的信号可确认提取步骤的成功，并监测可能导致偏差或 PCR 假阴性结果的 PCR 抑制剂的共同纯化。对照组中的看门基因或尖峰基因不能监测整个提取过程，尤其是裂解步骤，对于看门基因，还不能监测提取效率、降解样品以及看门基因表达水平变化的可能性。
什么是 RNA 提取中的内部 RNA 控制？
在进行 RNA 提取时，最好在裂解前将外源 RNA 模板添加到样品中。然后，这种对照 RNA 与样本 RNA 共同纯化，可作为整个提取过程的 PCR 阳性对照进行检测。
是否必须进行内部 PCR 控制？
尽管尚未强制执行，但世界各地的监管机构正在收紧关于增加内部控制的建议，欧盟：IVDD to IVDR 2017/746 “针对一个特定分析物或多个分析物具有定量或定性赋值的控制材料应与设备归入同一类别”。与 FDA（”确保器械有效性的一般控制”）、TGA（”在使用时为用户提供器械性能的规定”）、MHLW 和 ANVISA 制定的 MDSAP
使用 RT-qPCR 提取对照组时需要多小心？
RT-qPCR 提取对照是胶束状的，因此处理时需要小心。我们建议将 RT-qPCR 提取对照保存在 -80 ᵒC，并在加入样品前将其加入裂解缓冲液中。
我是否需要提供 RT-qPCR RNA 提取对照的引物和探针？
RT-qPCR 提取对照的引物和探针在对照混合液中。
为什么 RT-qPCR 提取对照有两种颜色？
这两种颜色是 RT-qPCR 提取对照探针上的荧光染料。控制混合红（Cy5 – 发射波长 = 670nm）和控制混合橙（HEX – 发射波长 = 560nm）。这样，您就可以在多重 RT-qPCR 检测中选择适合现有方案的一种。
RT-qPCR 提取对照组需要特定的提取方法吗？
不会，RT-qPCR 提取对照可与市售硅胶膜提取试剂盒和 CHELEX 基质配合使用，并已在多种 qPCR 平台上进行了测试。
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