使用引物和 Taq DNA 聚合酶对人类基因组 DNA 进行一式两份的序列稀释(分别为 1 μg、200 ng、100 ng、50 ng、25 ng 和 12.5 ng,1-6),以扩增人类 myc 基因的 450 bp 片段。所用基因片段的 GC 含量为 61%,选择该片段是为了展示 Taq DNA 聚合酶的高产率和灵敏度,使其成为扩增复杂 PCR 模板的最佳选择。
Taq 稀释缓冲液需要加入聚合酶、反应缓冲液、dNTPs 和MgCl2,以及引物和模板。
| 说明 | Taq HS 抗体是抗 Taq 单克隆抗体的混合物,旨在室温下抑制 Taq DNA 聚合酶的活性。它可用于制备热启动 PCR 或 qPCR 母液,有助于防止非特异性扩增和引物二聚体的形成,提高特异性和灵敏度,同时允许在常温下组装反应。 |
| 浓度 | 10 毫克/毫升 ≤ 5% |
| 外观 | 无色透明溶液 |
| 应用 | PCR、多重 PCR、qPCR、多重 qPCR |
| 样品类型 | cDNA, DNA |
| 演示文稿 | 1 瓶 |
| 存储 | -20 °C |
| 混合稳定性 | 见外标签 |
| 灵敏度 | 使用人类基因组 DNA 稀释系列进行 qPCR,以确定限制模板浓度下的特定产物 |
| 效率 | 测试样本和参照样本之间的 ± 0.5 Ct 差异 |
| DNA 污染 | 在大肠杆菌和小鼠基因组 DNA 特异性目标的 PCR 扩增中未检测到与阴性对照重叠的痕迹。 |
我们通常建议使用浓度为 25 单位/毫升(1.25 单位/50 微升反应)的 Taq DNA 聚合酶。不过,在特殊应用中,Taq DNA 聚合酶的最佳浓度可能在 5-50 单位/毫升(0.25-2.5 单位/50 微升反应)之间。
过量的 Taq 会导致过多的不需要的 DNA 片段(在凝胶上出现斑点),而过量的 Taq 则可能导致反应失败,检测不到任何产物。
由于难以用移液管移取少量酶,Taq DNA 聚合酶可在 Taq 稀释缓冲液中稀释。与 Taq 反应缓冲液不同的是,Taq 稀释缓冲液可用于储存 Taq DNA 聚合酶,使其在 -20 °C 下长期稳定。
降低模板浓度有助于最大限度地减少抑制剂的浓度,也可以增加 DNA 聚合酶和引物的用量。在某些情况下,如果无法获得 DNA,可能还需要增加一个预处理步骤。
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